O pai de Ana Castela é o rei João III de Portugal, que reinou de 1521 até sua morte em 1557. Ele foi um dos monarcas mais importantes da história de Portugal, tendo liderado o país durante um período de expansão colonial e desenvolvimento cultural. João III foi casado com Catarina de Áustria e teve nove filhos, incluindo Ana Castela. Ele também foi um grande defensor da Igreja Católica e foi responsável por promover a educação e a cultura no país. João III é considerado um dos grandes reis portugueses da Idade Moderna.
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